根据法律规定，大客车在凌晨两点到五点不可以在国道行驶。由于高速公路本身的较低的安全系数。夜间能见度不高司机视认性差。夜间司机的驾驶疲劳，凌晨三四点是高速公路客车事故频发时段，大客车班次被安排在了五点之后，五点之前不允许行驶。禁止大客车行驶从根本上杜绝了此时间段的交通事故。
哪个时间段不能上国道
凌晨2点到5点禁止大巴车上高速，在国道上也是不允许行驶的。长途客运车辆凌晨2时至5时停止运行或实行接驳运输。
根据《道路旅客运输企业安全管理规范》第三十八条 客运企业在制定运输计划时应当严格遵守客运驾驶员驾驶时间和休息时间等规定：
（一）日间连续驾驶时间不得超过4小时，夜间连续驾驶时间不得超过2小时，每次停车休息时间应不少于20分钟
（二）在24小时内累计驾驶时间不得超过8小时
（三）任意连续7日内累计驾驶时间不得超过44小时，期间有效落地休息
（四）禁止在夜间驾驶客运车辆通行达不到安全通行条件的三级及以下山区公路
（五）长途客运车辆凌晨2时至5时停止运行或实行接驳运输从事线路固定的机场、高铁快线以及短途驳载且单程运营里程在100公里以内的客运车辆，在确保安全的前提下，不受凌晨2时至5时通行限制。
