(1)取_上经证实的噬菌体裂解液0.1mL于- -支无菌试管中,再加入0.1mL新鲜的大肠杆菌培养物,混合均匀
(2)取_上层琼脂培养基溶化并冷却至55°C (可预先溶化后置50~55°C水浴锅内保温备用),加入0.2mL上述噬菌体与细菌的混合物,混匀后快速倒入含地层培养进的平板上,铺匀,置37°C培养24h
(3)取出培养的平板仔细观察平板上噬菌斑的形态特征(如噬菌斑形状、大小、清亮程度等)。此过程制备的裂解液中往往有多种噬菌体,需进一步纯化
(4)纯化时,通常采用接种针在单个噬菌斑中刺一.下,蘸取少许噬菌体接入含有大肠杆菌的液体培养基中,置37°C振荡培养,直至试管中菌悬液由浑浊变清培养物经离心后取上清液,再重复步骤(2)、(3)直到出现的噬菌斑形态一致为止